Rumah Sakit Umum Kartini Kupang merupakan Rumah Sakit swasta yang didirikan sejak tanggal 27 November tahun 2013. Awalnya Rumah Sakit ini merupakan pengembangan dari poliklinik dan rumah bersalin sederhana di Jln Ahmad Yani yang dimulai pada tahun 1982 dan kemudian berkembang menjadi Klinik Kartini yang berlokasi di Jl. Eltari No 2 Kupang. Pada tahun 2006 Klinik kartini mengembangkan pelayanannya menjadi sebuah “Klinik Praktek Dokter Spesialis Bersama”. Sejalan dengan jumlah pasien yang terus meningkat maka, dipertimbangkan untuk memperluas &mengembangkan pelayanan klinik menjadi sebuah Rumah Sakit. Oleh karena daya tampung dan luas lahan pada Klinik Kartini di jalan Eltari II terbatas, maka dipilih lokasi Rumah Sakit yang akan dibangun di Jl. Frans Seda No. 17 yang merupakan lokasi yang sangat strategis karena berada di jalur umum yang mudah di akses dan berada di kawasan/area bisnis. Pada tanggal 29 Juli tahun 2016 Lulus Akreditasi Rumah Sakit Program Khusus (Progsus) dengan Predikat “ Perdana”, dan pada bulan Juli tahun 2019 lulus Akreditasi Rumah Sakit dengan Predikat “ Madya”.